La cromatografia su strato sottile è un metodo di analisi chimica basato sull'uso di uno strato assorbente con uno spessore di 0,1-0,5 mm come fase stazionaria. Il metodo TLC può essere utilizzato in vari campi e consente la determinazione di un'ampia varietà di composti chimici.
Principio del metodo
Il metodo della cromatografia su strato sottile nasce dalla cromatografia su carta e le prime sperimentazioni sono state effettuate negli anni '80 del XIX secolo. L'uso attivo di questa analisi iniziò solo dopo il 1938.
La tecnica TLC include una fase mobile (eluente), una fase stazionaria (assorbente) e un analita. La fase stazionaria viene applicata e fissata su apposita piastra. La lastra può essere in vetro, alluminio o plastica: si tratta di substrati riutilizzabili che devono essere accuratamente lavati, asciugati e preparati per l'applicazione del sorbente dopo ogni utilizzo. È anche possibile utilizzare piatti di carta che vengono smaltiti dopo l'uso.
Il gel di silice viene spesso utilizzato come fase stazionaria, ma è possibile utilizzare altri assorbenti, ad esempio l'ossido di alluminio. Quando si utilizza questo o quel sorbente, la tecnologia deve essere rigorosamente seguita affinché il risultato sia accurato, ad esempio perché il gel di silice può dare un risultato errato se l'aria in laboratorio è troppo umida.
I solventi sono usati come fase mobile, ad esempio acqua, acido acetico, etanolo, acetone, benzene. La scelta di un solvente deve essere presa in modo responsabile, perché il risultato della cromatografia dipende direttamente dalle sue qualità (viscosità, densità, purezza). Per ogni campione analizzato viene selezionato un singolo solvente.
Analisi
Il campione deve essere diluito in un solvente. Se non si verifica una dissoluzione completa e rimangono troppe impurità, il campione può essere pulito mediante estrazione.
L'applicazione del campione sulla piastra può essere eseguita automaticamente o manualmente. L'applicazione automatica utilizza un metodo di microspray in cui ogni campione viene spruzzato sull'area appropriata del substrato. Per l'applicazione manuale, viene utilizzata una micropipetta. I segni a matita sono posti sulla piastra per ogni campione. Ogni campione viene applicato con un capillare alla piastra in una linea a una distanza sufficiente dai segni in modo da non reagire con il carbonio del piombo.
La piastra viene posta in un recipiente, sul fondo del quale viene versato l'eluente. Il supporto viene posizionato con un bordo nel recipiente fino alla linea segnata. Il recipiente è ben chiuso per evitare l'evaporazione della fase mobile. Sotto l'azione delle forze capillari, l'eluente inizia a risalire lo strato assorbente. Quando l'eluente raggiunge un certo livello, la piastra viene rimossa dal recipiente e asciugata.
Se la sostanza desiderata non ha colore, non sarà visibile sul substrato. Pertanto, viene eseguita la visualizzazione: lavorazione della piastra con vapore di iodio o altri coloranti.
Dopo tale elaborazione, il risultato viene valutato. Sul assorbente compaiono aree colorate di intensità variabile. Per determinare una sostanza (o un gruppo di sostanze), le aree colorate, la loro dimensione, intensità e mobilità vengono confrontate con un campione di riferimento.
Il metodo TLC è ampiamente utilizzato perché è veloce, economico, accurato, intuitivo, non richiede apparecchiature complesse ed è di facile interpretazione.
